Barbara Topsøe-Rothenborg (født 29. august 1979 i København) er en dansk skuespiller og instruktør.
Hun er nok mest kendt som barneskuespiller, hvor hun som 6-årig havde titelrollen i tv-serien Nana og hendes roller som Krummes kæreste i Krummerne-film fra starten af 1990'erne. Efterfølgende var hun blandt andet vært på TV 2-programmet Puls.
Barbara er datter af skuespillerinden Judith Rothenborg, havde som barnestjerne succes som skolepigen Nana i tv-serien af samme navn. Efter succesen havde hun en række mindre filmroller, bl.a. som Krummes kæreste i Krumme-filmene og blev senere TV-vært for ungdomsprogrammet "Puls" på TV 2. Som 21-årig flyttede hun til Los Angeles, hvor hun tog en instruktøruddannelse på en kendt skuespillerskole i Hollywood. Hun har bl.a. instrueret Regner Grastens amerikanske udgave af "Kærlighed ved første hik" - "Love at First Hiccup". Efter ti et halvt år i USA vendte hun tilbage til Danmark. Barbara Rothenborg blev den 23. august 2014 gift i Frederiksberg Kirke med Martin Madsen, der arbejder med visuelle effekter. Parret blev skilt i 2022. Siden har Barbara Topsøe-Rothenborg været kæreste med ingeniør Mikkel Otte.